環境研究センター　研究支援事業部

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二次元電気泳動からMS/MS解析、データベースサーチまでお客様のニーズに合わせ、お手伝いさせていただきます。電気泳動のみのサービスも承ります

■等電点（PI)の相違によって、タンパク質を分離する方法です。
■弊社ではAmasham Bioscience社の装置を使用して、等電点電気泳動を行います。

■弊社では以下のIPGストリップゲルをご用意しております。お客様のサンプルに合わせて、サイズ等、ご指定ください。

ゲルサイズ	PHレンジ幅	推奨サンプル量（ug of protein)
ゲルサイズ	PHレンジ幅	銀染色	CBB染色
11cm	4‐7	10-20	50-300
	6‐11 3‐5.6 NL 5.3‐6.5 6.2‐7.5 7‐11NL	20-40 〃〃〃〃	100-600 〃〃〃〃
	3‐10 3‐11 NL	7-15 〃	50-120 〃
24cm	4‐7 3‐7 NL	45-90 〃	200-1300 〃
	6‐9 3‐5.6 NL 5.3‐6.5 6.2‐7.5 7‐11NL 3.5‐4.5 4‐5 4.5‐5.5 5‐6 5.5‐6.7	80-200 〃〃〃〃〃〃〃〃〃	400-2000 〃〃〃〃〃〃〃〃〃
	3‐10 3‐10 NL 3‐11 NL	30-60 〃〃	200-600 〃〃

Ettan IPGphor IsoelectricFocusing Unit

■タンパク質をPI値の差で分離する等電点電気泳動に対し、SDS電気泳動は分子量の大きさでタンパク質を分離します。
■SDS-電気泳動はAmashamBioscience社の “Hoefer SE 600 Ruby”または”Ettan DALT を使用いたします。SDS-PAGEのみご希望の場合は、ゲルサイズ、濃度、厚さを指定してください（下表参照）。

ゲルサイズ(cm×cm)	ゲル厚(mm)	濃度(%)
16×16	1.0	12.5※
14×16	1.5	12.5※
26×20	1.0	12.5※

※ゲル濃度はご相談に応じます。

電気泳動装置
左；SE Ruby 右；DALT six

■電気泳動後のゲルは通常の操作として、CBB染色を行います。ただし、蛋白量の少ない場合は染色されない場合もあります。 ■銀染色はCBB染色と比較して、10～100倍感度良く染色できます。弊社では質量測定を行う場合、MS用の銀染色（グルタルアルデヒドなし）を行います（ただし通常の銀染色よりは1桁感度が悪くなります）。
CBB染色	銀染色

■染色したゲルはご指定部を切り取りの後、ゲル内消化いたします。

ゲル内消化の流れ
還元アルキル化 ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓	ゲルの中に存在するタンパク質のシステイン残基を還元処理し、たんぱく質の分解を防ぐための作業です（ピリジルエチル化）。弊社では以下の方法を還元アルキル化方法として取り扱っております。・ピリジルエチル化・カルバミドメチル化 ※ご指定のない場合はピリジルエチル化を行います。
酵素消化 ↓ ↓ ↓ ↓ ↓	酵素（トリプシン）を用いてタンパク質をペプチド断片にします。
ペプチド抽出	酵素消化したペプチド断片は分子量が小さいのでゲルから抽出することが出来ます。

※ゲル内消化からサンプルのご依頼を希望される方は、ゲル片を脱色液に入れてご送付ください。

■ゲルから抽出したペプチド断片を、質量分析計によって測定します。
LC；Paradigm4　MS/MS；LCQ Advantage	イオン源；ナノスプレー（チューンナップの1例）

	■測定結果をデータ化し、MASCOT、TurboSEQUESTの2種類のデータベースサーチにかけることが可能です。　 ■SCOREの高いものから順に、お客様にご報告させていただきます。
MASCOT検索結果	TurboSEQUEST検索結果

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解析結果はメールにて速報として簡易報告、その後、報告書と電子媒体をお送りいたします。

■電気泳動

１次元電気泳動(SDS-PAGE)	11cm	\52,500
2次元電気泳動	11cm	\63,000
2次元電気泳動	24cm	\73,500

弊社での染色はCBB染色及び銀染色に限ります。
電気泳動の条件検討が必要な際は別途、検討費用が発生いたします。
2枚以上で同条件の際は10%OFF

■ゲル内消化～質量分析～データーベースサーチ

ゲル内消化～nanoLC-ESI-MS/MS～データーベースサーチ	\210,000
nanoLC-ESI-MS/MS～データーベースサーチ　※1	\147,000
ゲル内消化～nanoLC-ESI-MS/MS　※2	\147,000
解析不可の場合	\ 42,000

※1　蛋白質量、還元アルキル化、消化酵素の種類のご連絡が必須事項になります。
※2　測定したデータはクロマトグラム、スペクトルを提出いたします。
　　　　数値化データ等が必要な場合は別途ご相談ください。
5サンプル以上は10％OFF

■セット料金の一例

2D　24cm～1ｽﾎﾟｯﾄのゲル内消化,質量分析,データーベースサーチ

\262,500

お試し価格、その他セット価格の設定もございます。お問い合わせください。

■お客様にはご注文いただく際に、解析サービスオーダーシートをご記入いただいております。
　オーダーシートは、サンプルを前処理・測定するのに必要な事項が含まれております。
　可能な限り、詳細な情報をお知らせください。

■サンプル送付についてのご注意
　（たんぱく質の失活等を招き、前処理および測定が上手くいかない可能性があります。）

たんぱく質精製後のサンプルで二次元電気泳動を行う場合→Lysis Bufferに溶解
ゲル内消化からの場合→ゲルを脱色液に浸し、冷蔵で送付

※Bufferの組成等が不明な方はご相談ください。
※弊社では、依頼を受けたお客様に低吸着チップを送付しております。
　そちらの方にサンプルを入れてお送りください。

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